《鑑識英雄II正義之戰》除了著重第1季的特色以鑑識科學偵辦刑案，同時加重在辦案過程中追捕嫌犯的武打場面，并将和鑑識專家、知名法醫、檢察署、消防局等机构加强合作。蔡淑臻饰演杨茜昵称：小茜，刑事局警员，跆拳道黑带、泰拳高手。与雷一鸣互有好感。国家级跆拳道黑带、泰拳高手。好行侠仗义，充满正义感和人情味，在生活上是个不拘小节的爽朗女生，在职场上是个冲劲满满的工作狂，不喜欢按照规矩办事。父亲 是开死亡证明的法医，妈妈是开出生证明的妇产科医师，奇妙的家庭背景造成她特殊的个性。她从小讨厌父亲身上的尸臭，不自觉习惯性憋气造成心因性的嗅觉丧失。周孝安饰演雷一鸣昵称：雷公，犯罪科学鉴识中心(C.S.I.C)组长，擅长DNA鉴识。与杨茜互有好感。鉴识小组的主要领导者。个性沉稳，总扮演兄长角色。性格耿直，有道德洁癖，在工作上彻底讲求做事法则和科学证据，绝不妥协一板一眼的个性，也常让他对案情少了人情角度和邪门歪道的思考。他喜欢研究植物和种子、喜欢把厨房当化学实验室来做菜、不欲人知的还有喜欢集点数的嗜好。因为喜欢杨茜又觉得不该有办公室恋情，反而对她故意冷淡。
